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植物五种酶活性检测方法.doc

植物五种酶活性检测方法

陆弟
2019-06-28 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《植物五种酶活性检测方法doc》,可适用于工程科技领域

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选择茶树不同品种每个茶枝接种头叶蝉按不同的时间点(hhhhhhhhh)取样每个样品重复三次测定PPOPODPALCATLOX五种酶活。、多酚化酶(PolyphenoloxidasePPO)活性的测定适量茶鲜叶(g),料液比:加入内含PVP(wv)经遇冷的pH为的柠檬酸磷酸盐缓冲液(molL),冰浴研磨隔夜浸提h于℃、rmin离心min取上清液过滤得到初酶液。取ml初酶液加入molL柠檬酸磷酸盐缓冲液(pH)uL,混合反应液ml(molL柠檬酸磷酸盐缓冲液:脯氨酸:邻苯二酚=::)反应min(℃恒温水浴锅)mol尿素ml终止反应nm波长测吸光度。对照为不加邻苯二酚的反应混合液。酶活性单位:本实验条件下以邻苯二酚反应液在nm处吸光度值每分钟增加为一个活性单位。、苯丙氨酸解氨酶(PhenylalanineammonialyasePAL)活性的测定称取新鲜样品g于预冷研钵中加入mlmolL(pH)硼酸钠硼酸缓冲液加入适量的石英砂冰浴研磨后转入离心管中。混匀后在℃冰箱中浸提h。℃rmin离心min取上清液即为酶提取液。取酶提取液ml加入由硼酸钠缓冲液配制的molLL苯丙氨酸ml蒸馏水摇匀在℃水浴上反应min冰浴中终止反应测定OD值以相同体积缓冲液代替酶液进行同样的反应为对照。PAL的酶活性以每小时在nm处吸光度变化OD为一个活力单位。、脂氧合酶(linoleate:oxygenoxidoreductaseLOX)活性的测定取g新鲜样品加ml经℃预冷的molL(pH)的trisHCL缓冲液冰浴上研磨。℃、rmin离心min,上层清液即为LOX酶提取液。以mlgL亚油酸作为底物加入ml酶液在nm处测定吸光值每隔s读数一次共测分钟。Lox酶活性单位以每分钟在nm处吸光度变化OD作为一个活力单位。、过氧化物酶(PDA)的活性测定(愈创木酚法)取克剪碎叶片于预冷研钵中加入ml的提取介质molLPH的磷酸缓冲液(含PVP聚乙烯吡咯烷酮)(先加ml研磨再加ml冲洗研钵)研磨匀浆转入离心管后于冰箱中冷提h。rmin离心min,得到酶初提液。取mlPBS磷酸缓冲液(MpH)加入ml液体(原液)愈创木酚(甲氧基酚)加热搅拌溶解冷却后加入ml的H,混匀后保存于冰箱中备用。取ml反应液并加入ul酶液以PBS为对照调零而后测定OD值(测定s读数一次分钟)。(边加样边测定如果慢的话要保证每个样品从加好样到开始计时的时间相差不大)酶活性计算:以每分钟OD值得变化(升高)为一个酶活性单位(u)。POD=(DeltaAtimesVt)(WtimesVstimestimest)(ugmin)DeltaA:为反应时间内吸光度的变化W为样品鲜重(g)t为反应时间(min)Vt为提取酶液总体积(ml(ml)Vs为测定时取用酶液体积(mlul)。、过氧化氢酶(CatalaseCAT)活性测定取克剪碎叶片于预冷研钵中加入ml的提取介质molLPH的磷酸缓冲液(含PVP)(先加ml研磨再加ml冲洗研钵)研磨匀浆转入离心管后于冰箱中冷提h。rmin离心min,得到酶初提液。取mlPBS(MpH)加入ml的HO(原液)摇匀即可。取ml反应液加入ml(可视情况调整)酶液以PBS为对照调零测定OD(紫外)。(测定s读数一次分钟)。酶活性计算:以每minOD值减少为个酶活性单位(u)。CAT=DeltaAtimesVt(WtimesVstimestimest)(ugmin)DeltaA:为反应时间内吸光度的变化W为样品鲜重(g)t为反应时间(min)Vt为提取酶液总体积(mlml)Vs为测定时取用酶液体积(ml,ml)。

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