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植物组织培养实验室的组成仪器设备及基本操作.ppt.ppt

植物组织培养实验室的组成仪器设备及基本操作.ppt

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2019-09-02 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《植物组织培养实验室的组成仪器设备及基本操作.pptppt》,可适用于医药卫生领域

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植物组织培养实验室的组成、仪器设备及基本操作一、植物组织培养实验室的结构及设计要求:完整的植物组织培养室通常包括洗涤室、化学实验室、接种室、培养室、细胞学实验室等部分。可以根据实际需要和条件进行设计。但从功能上至少包括准备室(化学实验室)、接种室以及培养室三部分并且按顺序排列。在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。第一节实验室结构、仪器设备及操作技术(一)准备室(化学实验室):主要功能:用于培养器皿的清洗、干燥、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。主要仪器设备及用品:药品柜、实验台、水槽、超声波洗涤仪、凉干架、干燥箱、各种玻璃器皿(烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等)、蒸馏水制造装置。天平、移液器、pH计、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、及培养基分装用品等、高压灭菌锅、冰箱。(二)接种室(无菌操作室):、功能:接种材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。接种室要求保持洁净与化学实验室之间应设置缓冲室。、仪器设备及用品:超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、磁盘、接种工具(各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等)等。(三)培养室:、功能:主要用于植物材料的培养。要求室内洁净并能保持一定的温度、光照以及湿度以促进植物材料的生长和分化。、仪器设备及用品:培养架及灯管、摇床(振荡器)、空调、自动定时器、加湿及除湿器、光照培养箱等。(四)细胞学实验室:、功能:主要用于培养材料的显微观察及照相等。、仪式设备及用品:体视显微镜、普通显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、配套显微照相装置、普通相机或数码相机、切片机及配套制片及染色用品等。体视显微镜用途:放大倍数~倍主要用于植物形态分化的观察、茎尖的切取。普通光学显微镜用途:用于植物切片观察确定植物的发育进程如:不定芽、不定胚的分化过程以及其它器官组织的分化等。倒置显微镜用途:主要用于细胞、原生质体的细胞分裂和细胞团形成的观察。(一)洗涤:普通器皿:采用洗衣粉、洗洁精等中性洗涤剂洗涤。难清洗器皿及移液管等:用水清洗后再用重铬酸钾洗液浸泡最后清水冲洗或用超声波仪清洗。重铬酸钾洗液的配制方法:g重铬酸钾溶于ml蒸馏水中将浓硫酸缓慢倒入重铬酸钾溶液中浓度比例为:。二、实验室基本操作:、器具灭菌:培养皿、解剖刀、镊子等用品。()干热灭菌:铝箔包好后放于恒温干燥箱内℃保温小时成本较高。()高压蒸汽灭菌:高压蒸汽灭菌锅内℃-分钟。()灼烧灭菌:接种时解剖刀及镊子等浸入%乙醇然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。(二)灭菌:灭菌是指用物理和化学方法杀死物体表面和内部的所有微生物(包括芽胞)使之呈无菌状态。经过灭菌的物品称ldquo无菌物品rdquo。、培养基灭菌:采用高压蒸汽灭菌。℃-分钟。培养基体积越大灭菌时间越长。高温高压灭菌对培养基成分的影响: apH值普遍下降。 b产生混浊或沉淀这主要是由于一些离子发生化学反应而产生混浊或沉淀。例如Ca与PO化合就会产生磷酸钙沉淀。 c不少培养基颜色加深。 d体积和浓度有所变化。 e营养成分有时受到破坏。、不耐高温材料的灭菌:采用过滤灭菌如IAA、ZT、天然有机添加物等。、外植体的表面灭菌:采用-%乙醇(秒)、有效氯%的次氯酸钠(分钟)、-的氯化汞(分钟)等杀菌剂中加入几滴吐温-或(Tween-或)效果较好。(三)无菌操作:、保持接种室的无污染环境定期熏蒸或喷雾处理。接种前打开超净工作台及紫外灯照射分钟关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作。、保持超净工作台的洁净:接种前用%乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾操作前将手和手臂用%乙醇消毒所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台。、点燃酒精灯进行操作接种材料前后灼烧瓶口工具要灼烧彻底防止交叉污染。、保持培养室的洁净发现污染及时挑出以减少污染源。、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽出入接种室换拖鞋以保持接种室的洁净。第二章植物组织培养实验室的组成、仪器设备及基本操作第一节实验室结构、仪器设备及操作技术一、植物组织培养实验室的结构及设计要求二、实验室基本操作*第二章植物组织培养实验室的组成、仪器设备及基本操作第二节培养基的组成、配制与灭菌一、培养基(medium)的组成和作用通常植物组织培养所用培养基包括以下六大类成分即矿质营养、有机成分、植物生长调节剂、碳源、琼脂以及其他附加物等。培养基的主要指标是:营养成分的浓度植物生长调节物质的浓度(一)矿质营养:矿质营养又称无机营养是指植物生长发育所需要的各种化学元素。矿质元素的生理作用:()组成各种化合物成为结构物质()许多酶和附酶的组成部分参与代谢()维持离子平衡、胶体稳定及电荷平衡等电化学作用()影响形态发生和组织、器官的建成等。根据植物对元素的吸收量可以把植物必需元素分为大量元素和微量元素。国际植物生理学会规定植物所需浓度大于mmoll的的元素称为大量元素。低于mmoll的元素称为微量元素。大量元素:C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S分别占植物干重的百分数为%、%、%、、%、、%、、%。微量元素:Fe、B、Mn、Zn、Mo、Cu、Co、Cl等。、大量元素:N、P、K、Ca、Mg、S等种大量元素依靠各种无机盐提供。不同植物种类和不同试验目的对元素的使用量要求不同需经试验确定。目前已选择出多种培养基配方用于植物组织培养。其中以MS应用最广泛。以MS为例中矿质元素分别由KNO、NHNO、KHPO、MgSOHO、CaClHO提供。大量元素中的氮通常采用硝态氮或铵态氮但铵态氮浓度过高会对有些植物的培养物造成伤害不适宜使用过高的浓度可以用谷氨酸、丝氨酸等来代替。、微量元素:植物组织的对其需要量极少过多会产生毒害如造成蛋白质变性、酶失活,代谢障碍等。各种微量元素均具有特定的生理功能如硼与蛋白质的合成及糖类的运输有关铜能促进离体根的形成锰参与植物的光合作用和呼吸作用钼为氮素代谢的重要元素。微量元素中铁的用量较大它对叶绿素的合成起重要作用由于在较高pH下FeCl极易形成Fe(OH)沉淀难以被吸收所以多用乙二胺四乙酸二钠盐与硫酸亚铁形成的螯合物并且单独配制。(二)有机成分:主要包括各种维生素和氨基酸常用的维生素:硫胺素(VB)、吡哆醇(VB)、烟酸(VB)、泛酸钙(VB)、生物素、钴胺素(VB)、叶酸等。常用的氨基酸:甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰氨、丙氨酸等。有时添加水解乳蛋白或水解酪蛋白为牛乳经酶法加工的水解产物含有种氨基酸的混合物用量-mgL,通常用于原生质体等培养。此外肌醇是另外一种重要的有机成分在维持离子平衡糖类的转化中起重要作用此外还参与磷脂代谢及等生理作用。它可以促进愈伤组织的形成不定芽、不定胚的分化。(三)植物生长调节物质:植物激素是植物代谢中产生的天然化合物它能直接影响植物细胞的分化、分裂以及影响植物的形态建成、开花、结实、成熟、衰老脱落、休眠、萌发等生理活动。在植物组织培养中主要通过植物激素及生长调节物质对离体的组织、器官的形态发生进行调控。包括诱导细胞分裂、愈伤组织的生长、根芽的分化以及体细胞胚胎发生等。常用的植物激素及生长调节物涉及五大类植物激素:、生长素类:、细胞分裂类:、赤霉素类:、脱落酸:、多胺、乙烯:、生长素类:组织培养中的功能是:促进细胞伸长生长和细胞分裂诱导形成愈伤组织促进生根。常用的有NAA、IAA、IBA、,-D等。、细胞分裂素类:功能:诱导芽的分化、促进侧芽萌发促进细胞分裂和扩大促进茎增粗抑制茎伸长延缓衰老。常用细胞分裂素有BA、KT、ZT、ip等。此外近年来发现苯基脲衍生物具有非常高的细胞分裂素活性在多种植物上应用。如TDZCPPU-PU等。、赤霉素类:主要具有诱导茎的细胞伸长对根无效对形成层细胞分化有影响与生长素协同作用可以诱导离体成花打破休眠等功能。常用GA、GA等。、脱落酸(ABA):促进休眠、衰老和脱落。组织培养中较少使用主要用于种质资源的离体保存。、乙烯:主要促进衰老和脱落高浓度易形态变化。(四)碳源:碳源主要为细胞提供合成新化合物的骨架为细胞的呼吸代谢提供底物与能源此外还能维持一定的渗透压。常用的碳源主要是蔗糖使用浓度在-gL此外果糖、葡萄糖、麦芽糖、山梨糖、甘露糖及可溶性淀粉等也常用于植物组织培养。(五)琼脂:琼脂作为固化剂用于组织培养中起支持植物的作用不提供营养为海藻中提取的一种高分子化合物仅溶于热水(oC以上)成为凝胶冷却后(oC以下)即凝固为凝胶。琼脂的用量通常在~gL。(六)有机附加物:、椰子汁:用量为~gL。、香蕉泥:使用量为~gL。、苹果汁、番茄汁等。(七)其他成分:、活性炭:使用量为。、抗生素:常用青霉素、链霉素、庆大霉素等用量在~mgL。、抑制酚类物质:抗坏血酸、生长抑制剂:常用矮壮素、比久(B)、多效唑(pp)、三碘苯甲酸、根皮酚等二、培养基的类型:、高盐浓度培养基:MS、B、SH等。适用于多数营养需求量较大的植物。、低盐培养基:WPM、White、Nitsh等。适用于木本植物的培养。          表N培养基的组成和配方三、培养基母液及激素母液的配制:由于培养基中元素用量少种类多因此每次称量繁琐因此通常将各种营养成分配制成母液保存。大量元素微量元素有机营养激素、器皿和用具的准备仪器包括万分之一天平百分之一天平pH计用品包括不同型号的烧杯(ml、ml、ml)容量瓶(ml、ml、ml)、移液管(ml、ml、ml、ml)、试剂瓶若干(ml、ml)、移液器(ul、ul)、滴管、玻璃棒、试管、各种规格三角瓶(ml、ml、ml)、培养基分装器漏斗、称量纸、标签纸、不同范围pH试纸、铅笔等。玻璃器皿用前清洗干净。、药品及蒸馏水准备:药品采用分析纯或化学纯试剂。水利用蒸馏水或去离子水。、母液配制:()配制母液原则:相同类型的试剂混合易形成沉淀的药品分开母液浓度要适宜用量要认真计算和核对药品要准确称量。()MS培养基母液的配制:MS培养基母液根据试剂特性通常配成四种母液即大量元素母液(或倍)、微量元素母液(或倍)、Fe盐(倍)、有机物(倍)。配置前先进行根据培养基组成和配制体积计算母液试剂用量然后称取药品大量元素可以用百分之一或千分之一天平微量元素铁盐和有机物用万分之一天平称量。*这节课()激素母液的配制:根据各种激素的使用浓度配制适宜的母液用万分之一天平称取激素溶剂溶解后加水定容。生长素类、赤霉素类及脱落酸等用%乙醇溶解细胞分裂素类用NHCl或NNaOH溶解。通常激素母液浓度生长素类为~mgml,细胞分裂素母液浓度为~mgml四、培养基的配制:量取母液:营养元素和激素。称量蔗糖、琼脂放入ml左右蒸馏水的锅内电路上加热使琼脂溶化。加入母液混合均匀调整pH值。四、培养基的配制:量取母液:营养元素和激素。称量蔗糖、琼脂放入ml左右蒸馏水的锅内电路上加热使琼脂溶化。加入母液混合均匀调整pH值。封口:用-层称量纸或瓶盖封口之后灭菌备用。分装入瓶每瓶-ml。五、培养基的灭菌(高压蒸汽灭菌):、加热:灭菌前检查灭菌锅内水量是否充足然后将培养基放于灭菌锅内改好盖关闭放气阀打开电源加热升温。、排气:当温度升至kgcm(C)时打开放气阀彻底排出锅内冷空气。然后关闭放气阀促使压力继续上升。、温度控制:当锅内压力升至kgcm(oC)时计时-分钟计时结束后关闭电源。、出锅:当灭菌锅自然冷却后取出培养基放置于接种室备用。、先天下之忧而忧后天下之乐而乐。mdashmdash范仲淹  、捐躯赴国难视死忽如归。mdashmdash曹植  、近乡情更切不敢问来人。mdashmdash宋之问  、气蒸云梦泽波撼岳阳城。mdashmdash孟浩然  、中夜四五叹常为大国忧。mdashmdash李白  、国耻未雪何由成名?mdashmdash李白  、当须徇忠义身死报国恩。mdashmdash李希仲  、科学虽没有国界但是学者却有他自己的国家。mdashmdash巴斯德  、虚荣的人注视着自己的名字光荣的人注视着祖国的事业。mdashmdash马蒂  、爱国主义就是千百年来固定下来的对自己的祖国的一种最深厚的感情。mdashmdash列宁  、利于国者爱之害于国者恶之。mdashmdash晏婴  、常思奋不顾身而殉国家之急。mdashmdash司马迁  、爱国如饥渴。mdashmdash班固  、一身报国有万死双鬓向人无再青。mdashmdash陆游  、死去原知万事空但悲不见九州同。王师北定中原日家祭无忘告乃翁。mdashmdash陆游  、人生自古谁无死留取丹心照汗青。mdashmdash文天祥  、天下兴亡匹夫有责。mdashmdash顾炎武  、南北驱驰报主情江花边草笑平生。一年三百六十日都是横戈马上行。mdashmdash戚继光  、瞒人之事弗为害人之心弗存有益国家之事虽死弗避。mdashmdash吕坤  、各出所学各尽所知使国家富强不受外侮足以自立于地球之上。mdashmdash詹天佑  、做人最大的事情是什么呢?就是要知道怎样爱国。mdashmdash孙中山  、我们爱我们的民族这是我们自信心的泉源。mdashmdash周恩来  、为中华之崛起而读书。mdashmdash周恩来  、以身许国何事不敢为?mdashmdash岳飞  、夜视太白收光芒报国欲死无战场!mdashmdash陆游  、位卑不敢忘忧国。mdashmdash陆游  、寄意寒星荃不察我以我血荐轩辕。mdashmdash鲁迅  、中国自古以来就有埋头苦干的人就有拼命硬干的人就有为民请命的人就有舍身求法的人。mdashmdash他们是中国的脊梁。mdashmdash鲁迅  、惟有民魂是值得宝贵的惟有它发扬起来中国人才有真进步。mdashmdash鲁迅  、我们中华民族有同自己的敌人血战到底的气概有在自力更生的基础上光复旧物的决心有自立于世界民族之林的能力。mdashmdash毛泽东  、与其忍辱生毋宁报国死。mdashmdash何香凝  、锦绣河山收拾好万民尽作主人翁。mdashmdash朱德、人民不仅有权爱国而且爱国是个义务是一种光荣。mdashmdash徐特立  、爱国的主要方法就是要爱自己所从事的事业。mdashmdash谢觉哉  、中国是古老的民族也是勇敢的民族。中华民族有两大优点:勇敢勤劳。这样的民族多么可爱我们爱我们民族(当然其他民族也有他们可爱之处我们决不忽视这一点)这是我们自信心的泉源。mdashmdash周恩来  、真正的爱国者是爱人类的爱国决不是排外。mdashmdash马铁丁  、爱国主义就是千百年来巩固起来的对自己的祖国的一种最深厚的感情。mdashmdash列宁  、必须经过祖国这一层楼然后更上一层楼达到人类的高度。mdashmdash罗曼middot罗兰  、黄金诚然是宝贵的但是生气蓬勃的勇敢的爱国者却比黄金更为宝贵。mdashmdash林肯**这节课

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